PCR実験も行っていますが、なぜ結果が常に他の結果よりもはるかに悪いのですか?
研究室では、他の人のPCRを見て、増幅効率が高く、電気泳動ストリップが完璧で、自分自身を見て、長い間行うのが難しく、反応が非常に良いと感じ、偽陽性テストの結果……何ですか問題?
私たちのパートナーの多くもさまざまな問題に直面していると思います。PCR実験で壁にぶつかると、無意識のうちに反応系内の要因を分析しますが、実験での消耗品の重要な影響を無視することがよくあります。
PCRの結果が間違っています。PCRの消耗品が本質的な理由である可能性があります。一方では、消耗品の微小汚染または抑制剤の導入は実験的な汚染を引き起こします。一方で、消耗品の不適切な選択も実験結果を悪化させます。
問題が再び発生します。PCRの消耗品にはさまざまな種類がありますが、実験をよりスムーズにするために適切な消耗品を選択するにはどうすればよいでしょうか。注意すべき問題は何ですか?今日は心配しないでI 長年の経験と組み合わせて、PCR消耗品の選択の一般的な問題を整理し、私はあなたを助けたいと思っています。
Q1:PCR消耗品が通常PP材料でできているのはなぜですか?
Huida:PCR供給は通常試薬またはサンプルと直接接触するため、ポリプロピレン(PP)材料は生物学的に不活性であり、生体分子に付着せず、優れた化学的耐性と温度耐性を備えています(121でオートクラップ可能)° C、熱サイクル中の温度変化にも耐えることができます)。
Q2:異なるサイズのPCRチューブ/プレートからどのように選択すればよいですか?
HUIDA:選択の目的:特定の実験要件に従って適切な製品を選択します。PCRチューブのサイズのほとんどは、PCR反応の要件を満たすことができます。これに基づいて、最初に少量のチューブを選択することをお勧めします。少量の反応チューブ/プレートはオーバーヘッドスペースが小さいため、熱伝導率が向上し、蒸発が減少します。同時に、サンプルの追加が多すぎたり少なすぎたりしないようにする必要があります。多すぎると熱伝導率の低下、こぼれ、相互汚染につながる可能性があり、少なすぎるとサンプルの蒸発損失につながる可能性があります。
一般的な反応チューブの仕様と容量:
シングル/コンバインドチューブ:0.5ml、0.2ml、0.15ml
96ウェルプレート:0.2ml、0.15ml
384ウェルプレート:0.04ml
Q3:サンプル量が少ない場合は、シングルパイプまたはコンバインドパイプを選択しますが、なぜフラットカバーとコンベックスカバーがあるのですか?
ホイダ:サンプル量が少ない場合は、シングルチューブまたはコンバインドチューブをお勧めします。ただし、反応容量が大きい場合は、シングルチューブが支配的であり、容量は0.5mLに達する可能性があります。また、フラットカバーとコンベックスカバーにはそれぞれ利点があり、具体的には以下の情報を参照できます。
シングルチューブ:0.2mlおよび0.5ml;サンプル量を柔軟に選択できます。
接続チューブ:0.2mlまたは0.15mlはオプションです。8本または12本のチューブが一般的です。
フラットカバー:qPCRに正確な蛍光シグナル伝達を提供できます。マークを書きやすい。
凸型カバー:PCR装置のホットカバーと接触して、圧力による反応チューブの変形を減らします。ただし、蛍光シグナルの伝達に影響を与えるため、qPCR実験には適用できません。
Q4:PCRプレートの中にはスカートが付いているものと付いていないものがあるのはなぜですか?
Huida:実際、PCRプレートのスカートは、自動化アプリケーションによりよく適応するように設計されており、機器の安定したサポートと機械的耐久性、およびピペッティングプロセス中のより高い安定性を提供します。
PCRプレートは一般的に非ヘムライン、ハーフヘムライン、フルヘムラインに分けられます。
それなしプレート:ほとんどのPCRマシンまたはqPCRマシンに適していますが、自動化アプリケーションには適していません。ピペッティングの過程で安定性は高くないので、プレートサポートと一緒に使用する必要があります。
ハーフスカートエッジプレート:ラベルやバーコードの塗布、自動塗布に対応でき、ピペッティングの安定性に優れています。
フルスカートエッジプレート:自動化された実験アプリケーションに非常に適しており、バーコードのラベルやアプリケーションにも適合させることができます。機械的強度が高く、バルジモジュールPCR装置で使用でき、ピペッティングの過程で高い安定性を備えています。
Q5 :PCRプレートの場合、コーナーとラベルがまったく同じでないのはなぜですか?
Huida:それはコーナーカットとマーキングの効果に依存します。
コーナーカット:PCRプレートのコーナーカット位置の選択は、簡単に位置決めできる適切な機器の要件によって異なります。
識別:PCRプレート上の英数字マーカーは、個々のウェルとサンプルの場所を識別するのに役立ちます。通常、エンボスカラーのデジタルロゴまたは刻印されたロゴ用です。一部の自動化されたアプリケーションでは、印刷およびマークされた反応プレートはより適切に密封されます。
Q6:一部のPCRプレートが凸状で、他のプレートが平坦なのはなぜですか?どちらが良いですか?
ホイダ:合うものが一番です。一般的なPCRプレートには、フラットポアマージンとハイポアマージンの2種類があります。
ほとんどのPCR装置に適したフラットホールマージンリアクションプレート。
立ち上がりエッジのあるリアクションプレートは、メンブレンのシーリングを容易にし、サンプル間の相互汚染のリスクを低減します。
Huidaは、PCR製品の製造と処理、および業界の高水準で長年の経験があります。製品ラインは豊富で、PCR実験アプリケーションの大部分を満たすことができます。実験用途に適した製品をお選びください。
投稿時間:2021年6月3日